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凯氏定氮（凯氏定氮法测定蛋白质含量公式）

　　

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凯氏定氮法的优缺点及注意事项

一、凯氏定氮法的凯氏凯氏优缺点

优点：

1、可用于所有食品的定氮定氮定蛋蛋白质分析中。

2、法测操作相对比较简单。白质

3、含量实验费用较低。公式

4、凯氏凯氏结果准确，定氮定氮定蛋是法测一种测定蛋白质的经典方法。

5、用微量凯氏定氮法可测定样品中微量的蛋白质。

缺点：

1、最终测定的是总有机氮，而不只是蛋白质氮。

2、实验时间太长，至少需要2小时才能完成。

3、精度差，精度低于双缩脲法。

二、凯氏定氮法注意事项

1、样品应是均匀的，固体样品应预先研细混匀，液体样品应振摇或搅拌均匀。

2、样品放入定氮瓶内时，不要沾附颈上，万一沾附可用少量水冲下，以免被检样消化不完全,结果偏低。

3、硝化时如不容易呈透明溶液，可将定氮瓶放冷后，慢慢加入百分之三十过氧化氢2到3毫升，促使氧化。

4、在整个消化过程中，不要用强火。保持和缓的沸腾，使火力集中在凯氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下,使氮有损失。

凯氏定氮法是什么

凯氏定氮法

蛋白质测定的国标规定方法——凯氏定氮法介绍

【GB/T 5009.5—1985】

食品中蛋白质的测定方法

本标准适用于各类食品中蛋白质的测定.

1 原理

蛋白质是含氮的有机化合物.食品与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵.然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋白质含量.

2 试剂

所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制.

2.1 硫酸铜.

2.2 硫酸钾.

2.3 硫酸.

2.4 2%硼酸溶液.

2.5 混合指示液：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合.也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合.

2.6 40%氢氧化钠溶液.

2.7 0.05N硫酸标准溶液或0.05N盐酸标准溶液.

3 仪器

定氮蒸馏装置：如图所示.

（图略）

4 操作方法

4.1 样品处理：精密称取0.2.0g固体样品或2～5g半固体样品或吸取10～20ml液体样品(约相当氮30～40mg),移入干燥的 100ml或500ml定氮瓶中,加入0.2g硫酸铜,3g硫酸钾及20ml硫酸,稍摇匀后于瓶口放一小漏斗,将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上.小心加热,待内容物全部炭化,泡沫完全停止后,加强火力,并保持瓶内液体微沸,至液体呈蓝绿色澄清透明后,再继续加热0.5h.取下放冷,小心加20ml 水.放冷后,移入100ml容量瓶中,并用少量水洗定氮瓶,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀备用.取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空白试验.

4.2 按图装好定氮装置,于水蒸气发生瓶内装水至约2/3处,加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸,以保持水呈酸性,加入数粒玻璃珠以防暴沸,用调压器控制,加热煮沸水蒸气发生瓶内的水.

4.3 向接收瓶内加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示液1滴,并使冷凝管的下端插入液面下,吸取10.0ml样品消化稀释液由小玻杯流入反应室,并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内,塞紧小玻杯的棒状玻塞.将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻杯,提起玻塞使其缓缓流入反应室,立即将玻塞盖紧,并加水于小玻杯以防漏气.夹紧螺旋夹,开始蒸馏.蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内,蒸馏5min.移动接受瓶,使冷凝管下端离开液面,再蒸馏1min.然后用少量水冲洗冷凝管下端外部.取下接收瓶,以0.05N硫酸或0.05N盐酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点.

同时吸取10.0ml试剂空白消化液按4.3操作.

4.4 计算

式中：X——样品中蛋白质的含量,%；

V1——样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积,ml；

V2——试剂空白消耗硫酸或盐酸标准液的体积,ml；

N——硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度；

0.014——1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数；

m——样品的质量(体积),g(ml)；

F——氮换算为蛋白质的系数.蛋白质中的氮含量一般为15～17.6%,按16%计算乘以6.25即为蛋白质,乳制品为6.38,面粉为5.70,玉米、高粱为6.24,花生为5.46,米为5.95,大豆及其制品为5.71,肉与肉制品为6.25,大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83,芝麻、向日葵为 5.30.

附加说明：

本标准由全国卫生标准技术委员会食品卫生标准分委员会提出,由卫生部食品卫生监督检验所归口.

本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草.

凯氏定氮法与分光光度法的优缺点

凯氏定氮法的优点：可用于所有食品的蛋白质分析中；操作相对比较简单；实验费用较低；结果准确，是一种测定蛋白质的经典方法；用改进方法（微量凯氏定氮法）可测定样品中微量的蛋白质。

缺点：最终测定的是总有机氮，而不只是蛋白质氮；实验时间太长(至少需要2h才能完成)；精度差，精度低于双缩脲法；所用试剂有腐蚀性。

分光光度法的优点：灵敏度高；仪器设备简单，操作简便、快速；应用广泛。

缺点是：准确度相对不高；有的检测不可用，有限制性。

蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，并换算成蛋白质含量。

扩展资料：

在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再以标准盐酸滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。

物质与光作用，具有选择吸收的特性。有色物质的颜色是该物质与光作用产生的。即有色溶液所呈现的颜色是由于溶液中的物质对光的选择性吸收所致。

由于不同的物质其分子结构不同，对不同波长光的吸收能力也不同，因此具有特征结构的结构集团，存在选择吸收特性的最大实收波长，形成最大吸收峰，而产生特有的吸收光谱。

参考资料来源：百度百科——凯氏定氮法

参考资料来源：百度百科——分光光度法

克氏定氮法和凯氏定氮法的区别

两种制氮方法不同。1，克氏定氮法 ：天然含氮有机化合物（如蛋白质）与浓硫酸共热时分解出氨，氨与硫酸反应生成硫酸铵。在克氏定氮仪中加入强碱碱化消化液，使硫酸铵分解出氨。用水蒸气蒸馏法将氨蒸入硼酸溶液中，然后再用标准稀硫酸酸溶液进行滴定，滴定所用稀硫酸酸的量（mol）相当于被测样品中氨的量（mol），根据所测得的氨量即可计算样品的含氮量。 原理是因为蛋白质含氮量通常在16%左右，所以将克氏定氮法测得的含氮量乘上系数6.25，便得到该样品的蛋白质含量。2，凯氏定氮法是由丹麦化学家凯道尔于1883年建立的，现已发展为常量、微量、平微量凯氏定氮法以及自动定氮仪法等，是分析有机化合物含氮量的常用方法。， 凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量通常占其总质量的16%左右(12%~一19%),因此，通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量(假设测定物质中的氮全来自蛋白质)，即: 蛋白质含量=含氮量/16%。[1

凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再

蛋白质是含氮的有机化合物。蛋白质与浓硫酸和催化剂一同加热硝化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，并换算成蛋白质含量。含氮量*6.25=蛋白含量

1.有机物中的氨在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，硝化生成（NH4)2SO4反应式为：

凯氏定氮法

2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集于H3BO3 溶液中

反应式为:

3. 用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，即得蛋白质的含量

反应式为：

或

试剂

所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。

2.1 硫酸铜。

2.2 硫酸钾。

2.3 硫酸。

2.4 2%硼酸溶液。

2.5 混合指示液：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。

2.6 30%氢氧化钠溶液。

2.7 0.025mol/L硫酸标准溶液或

凯式定氮仪是什么原理？可以测什么？

凯氏定氮仪是测量有机物中总氮的含量的方法。

凯氏定氮法是在催化剂存在的情况下，采用浓硫酸消化，将有机物氧化，氮转变为硫酸铵，然后加碱，将氨气蒸馏出来，用硼酸吸收，最后用强酸滴定，测定蒸馏出的氨含量，从而计算有机物中总氮含量的方法。最常见的是测定食品中蛋白质的含量，以及废水中总氮含量。

凯氏定氮法原理是什么？

凯氏定氮法原理是：

蛋白质是含氮的有机化合物。蛋白质与浓硫酸和催化剂一同加热硝化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，并换算成蛋白质含量。含氮量*6.25=蛋白含量。

凯氏定氮法的注意事项：

1、样品应是均匀的。固体样品应预先研细混匀，液体样品应振摇或搅拌均匀。

2、样品放入定氮瓶内时，不要沾附颈上。万一沾附可用少量水冲下，以免被检样消化不完全，结果偏低。

3、消化时如不容易呈透明溶液，可将定氮瓶放冷后，慢慢加入30%过氧化氢（H2O2）2-3ml，促使氧化。

4、在整个消化过程中，不要用强火。保持和缓的沸腾，使火力集中在凯氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下，使氮有损失。

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